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3、材料用具:洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片

材料:洋葱(可用葱、蒜替代);

用具:显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃皿、剪刀、镊子、滴管

药品:质量分数为15%的盐酸、体积分数为95%的酒精、质量浓度0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液(将龙胆紫溶解在质量分数为2%的醋酸溶液中配制而成)或醋酸洋红液

4、方法步骤:

(1)洋葱根尖培养:提前3—4天在广口瓶中培养洋葱,待根长5cm时剪取生长健壮的根来实验,(要清楚根尖分区,切取错误将无法实验);

(2)装片制作:流程为:解离——漂洗——染色——制片

取材:上午10时到下午2时根尖有丝分裂活跃,此时各种条件均适于细胞的有丝分裂,或者在夜间0—1时取材固定备用(固定也用1份冰醋酸和3份体积分数为95%的酒精配制),剪取根尖2—3mm淡黄色区域。

①解离:

解离液:质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精1:1混合均匀;解离时间:室温下3—5min,待酥软即可,此时为乳白色。解离时间不足,解离不充分不易压开;解离时间过长则解离过度,细胞散开不规则;

解离目的:去除细胞间质使细胞彼此分离

②漂洗:

待酥软后放入盛有清水的玻璃皿中漂洗;漂洗时间:约10min。

漂洗目的:去除根尖上多余的解离液(酸性物质盐酸),防止解离过度和利于碱性染料染色

③染色:

原理:染色质中的碱性蛋白质组蛋白被染成深色(DNA未被着色)

染液:0.01g/ml—0.02g/ml的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)

时间:3—5min;适可: 染色时间过长染色过深,蓝紫色一片不易观察

时间过短染色过浅不易观察

④制片:取出根尖放在载玻片上,加一滴清水,用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一载玻片,用拇指轻压使细胞均匀散开(作用:使细胞彼此分散)

(3)观察:如果自制装片效果不太理想,可以观察洋葱根尖固定装片

①用显微镜观察,注意显微镜的正确使用(见显微镜专题)

低倍镜观察:找到分生区:细胞呈正方形,排列紧密,有的细胞处于分裂状态;找到处于分裂状态的细胞移至视野中央,换上高倍镜

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