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(1)从基因文库中获取

基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。

构建基因文库的目的：为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。

基因组文库：含有一种生物的所有基因。

部分基因文库(如cDNA文库)：含部分基因，可由mRNA反转录而来。

(2)利用PCR技术扩增目的基因

PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

原理：DNA双链复制

原料：模板DNA;RNA引物;四种脱氧核苷酸;热稳定DNA聚合酶(Taq酶);

方法：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。

过程：热变性(90-95℃ )、退火(55-60℃)、延伸(70-75℃)。

特点：指数形式扩增

二.基因表达载体的构建(基因工程的核心—体外进行)

1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在;可以遗传给下一代;使目的基因能够表达和发挥作用。

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3.方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。

目的基因与运载体结合(以质粒为运载体)

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