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4.条件：同种限制酶、DNA连接酶、(目的基因、启动子、终止子、标记基因)
三.将目的基因导入受体细胞
转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
①导入植物细胞：常用农杆菌转化法(将构建的载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞)，基因枪法、花粉管通道法。
②导入动物细胞：显微注射法(将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中)
③导入微生物细胞：Ca2+处理受体细胞成为感受态细胞，再进行混合。
提示：农杆菌转化法的原理是利用农杆菌(胞内寄生菌)对植物的感染而把目的基因导入受体细胞。
四.目的基因的检测和鉴定
分子检测：导入检测+表达检测
①导入检测：利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链(作探针)与受体细胞中提取的DNA杂交，看是否有杂交带。
②表达检测：目的为了检测是否转录出了mRNA，利用DNA-mRNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链(作探针)与受体细胞中提取的mRNA杂交，看是否有杂交带。
③表达检测：目的为了检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原-抗体杂交，看是否有杂交带。
个体水平的鉴定：进行抗虫、抗病的接种实验，根据其性状判断是否表达。
提示：①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交;②抗原-抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的
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